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无尘室洁净区沉降菌监测规程(2013最新标准规范)
资料来源:广州启绿空气净化设备有限公司   日期:2013-01-21   人气:   标签:无尘室 沉降菌监测 洁净区
       启绿净化为您选编的无尘室洁净区沉降菌监测规程(2013最新标准规范),主要从适用于无尘车间洁净区(室)的沉降菌的监测,本测试方法利用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经48小时以上培养,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5h,再将培养皿盖上盖后倒置。对非单向流,如10000级,100000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。


目的:
     建立洁净区(室)中沉降菌的监测规程,保证药品在规定的洁净级别内进行生产。
    2.  依据:    
     国家标准GB/T 16294-1996。
    3.  范围:
    本标准适用于洁净区(室)的沉降菌的监测。
    4.  职责:
     QA洁净度监测人员、 QC微生物检验员对本标准的实施负责。
    5.  程序
5.1.        定义:
    5.1.1.  洁净室:对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
5.1.2.        洁净工作台:一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。其特点是自
身能够供给经过过滤的空气或气体,如垂直层流洁净罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。
5.1.3.        洁净度:洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允
许统计数。
    5.1.4.  菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU。
通常用个数表示。
    5.2.  测试方法:
    5.2.1.  方法概述:本测试方法利用沉降法,即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿,经48小时以上培养,在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数,来评定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
    5.2.2.  所用的仪器和设备:
5.2.2.1.        高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。
5.2.2.2.        恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。
5.2.2.3.        培养皿:
    5.2.2.3.1.  一般采用ф9omm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
5.2.2.3.2.        使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20min。
    5.2.3.  培养基:普通营养琼脂培养基。
    5.2.3.1.  将培养基加热熔化,冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养
皿,每皿约15ml。
    5.2.3.2.  待琼脂培养基凝固后,将培养基平皿放入30-35℃恒温培养箱中培养48
小时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可供采样用,制备好的培养基平皿应在2-8℃的环境中存放。
    5.2.4.  测试步骤:
    5.2.4.1.  采样方法:将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点,打开培养皿盖,使培养基表面暴露0.5h,再将培养皿盖上盖后倒置。
    5.2.4.2.  培养:
    5.2.4.2.1.  全部采样结束,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
    5.2.4.2.2.  在30~35℃培养,时间不少于48h。
    5.2.4.2.3.  每批培养基应有对照试验,检查培养基本身是否污染,可每批选定3只
培养皿作对照培养。
    5.2.4.3.  菌落计数:
    5.2.4.3.1.  用肉眼直接计数,然后用5-10倍放大镜检查,有否遗漏。
若培养皿上有2 个或2个以上菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
 
    5.2.5.  注意事项:
    5.2.5.1.  测试用具要做灭菌处理,以确保测试的可靠性、正确性。
    5.2.5.2.  采取一切措施防止人为对样本的污染。
    5.2.5.3.  对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
    5.2.5.4.  由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面
仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。
    5.2.5.5.  采样前应仔细检查每个培养皿的质量,如发现变质、破损或污染的应剔除。
    5.3.  测试规则:
    5.3.1.  测试状态;
    5.3.1.1.  沉降菌测试前,被测试洁净室(区)的温湿度须达到规定的要求,静压差、必须控制在规定值内。
5.3.1.2.        沉降菌测试前,被测试洁净室(区)已经过消毒。
5.3.1.3.        测试状态有静态和动态两种,测试状态的选择必须符合生产的要求,并在
报告中注明测试状态。
    5.3.2.  测试人员:
5.3.2.1.        测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
5.3.2.2.        静态测试时,室内测试人员不得多于2个人。
    5.3.3.  测试时间:
    5.3.3.1.  对单向流,如100级净化房间内及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
    5.3.3.2.  对非单向流,如10000级,100000级以上的净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。
  沉降菌计数:
    5.3.4.1.  采样点数目及其布置;
5.3.4.1.1.        最少采样点数目:
    沉降菌的最少采样点数可按表1确定。在满足最少测点数的同时,还宜满足最少培养皿数,见表2。
表1.最少采样点数目
面积(m2
洁净度级别
100
10,000
100,000
<10
2~3
2
2
≥10 ~<20
4
2
2
≥20 ~<40
8
2
2
≥40 ~<100
16
4
2
≥100 ~<200
40
10
3
注:表中的面积,对于单向流洁净室,指的是送风面积,对于非单向流洁净室,指的是
房间面积。
 
 
    表2.最少培养皿数:
 
 
洁净度级别
所需ф90mm培养皿数(以沉降0.5h计)
100
14
10,000
2
100,000
2
    5.3.4.1.2.  采样点的布置:
5.3.4.1.2.1.        工作区测试点位置离地0.8-1.5m左右(略高于工作面)。
5.3.4.1.2.2.        可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点,采样点的布置应力求
均匀,避免采样点在某局部区域过于集中,某局部区域过于稀疏。
    5.3.5.  记录:测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。        
             5.3.6.  结果计算:
5.3.6.1.        用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
5.3.6.2.        平均菌落数的计算见下式:
平均菌落数  m  =
m1+m2+…mn
n
式中    m 为平均菌落数
        m1为1号培养皿菌落数
        m2为2号培养皿菌落数
        mn为n号培养皿菌落数
            n 为培养皿总数
    5.3.7.  结果评定:用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
5.3.7.1.            洁净室(区)内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。见表3。
5.3.7.2.            若某洁净室(区)的平均菌落数超过评定标准,则必须对此区域先行消毒,
然后重新测试两次,测试结果必须合格。
表3
洁净级别
100级
10000级
100000级
300000级
标准
(平均)
1个/皿
3个/皿
10个/皿
15个/皿
    6.  附:
     沉降菌监测记录ZL0070 00。
 
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